Da bi preprečili navzkrižno kontaminacijo med obratovanjem, so glavne zahteve za njegovo načrtovanje, gradnjo in upravljanje operacij naslednje:
1. Projektiranje in izdelava laboratorija, varni delovni sistem ali varnostni standardni operativni postopki izpolnjujejo zahteve sedanjih&"Splošne zahteve za laboratorijsko biološko varnost GG"; GB19489.
2. PCR je razdeljen na štiri funkcionalna območja glede na delovne korake, in sicer območje za shranjevanje in pripravo reagenta, območje za pripravo vzorca, območje za amplifikacijo in območje za analizo produkta za amplifikacijo. Če je v realnem času opremljen fluorescenčni instrument PCR, lahko območja za ojačanje in analizo izdelkov združite. Vsako funkcionalno območje mora biti jasno označeno, opreme in izdelkov na različnih funkcionalnih območjih pa ne smete mešati.
Smer pretoka zraka v laboratoriju PCR lahko izvajamo v skladu s prostorom za shranjevanje in pripravo reagenta → območjem za pripravo vzorca → območjem za ojačitev → območjem za analizo izdelka, da preprečimo, da bi ojačani izdelki vstopili v predhodno ojačano območje skupaj s pretokom zraka. Izvedemo ga lahko na način zniževanja zračnega tlaka iz območja skladiščenja in priprave reagenta → območje za pripravo vzorca → območje za ojačitev → območje za analizo amplifikacijskega izdelka. To je mogoče doseči z namestitvijo izpušnih ventilatorjev, naprav z izpušnim tlakom ali drugih izvedljivih metod.
3. Pri vstopu v vsako delovno območje bi morali strogo slediti eni smeri, to je območje za shranjevanje in pripravo reagentov → območje za pripravo vzorca → območje za ojačanje → območje za analizo izdelka za ojačanje. Uporabljati je treba različna delovna področja (na primer različne barve). Delavci ne smejo sneti delovnih oblačil, ko zapustijo vsako delovno območje.
4. Čiščenje laboratorija je treba izvesti v smeri območja za shranjevanje in pripravo reagentov → območje za pripravo vzorca → območje za amplifikacijo → območje za analizo proizvoda, ki je okrepljeno. Različna eksperimentalna območja bi morala imeti lastne čistilne naprave za preprečevanje navzkrižne kontaminacije.
5. Po končanem delu je treba delovno površino takoj očistiti. Površina laboratorijske klopi na delovnem območju bi morala prenesti učinke dezinfekcije in čiščenja kemikalij, kot je natrijev hipoklorit. Ultravijolično obsevanje na površini laboratorijske klopi mora biti priročno in učinkovito. Ker sta razdalja in energija ultravijoličnega obsevanja zelo pomembna za učinek dekontaminacije, lahko uporabimo premično ultravijolično sijalko (valovna dolžina 254 nm), po opravljenem delu pa jo lahko prilagodimo tako, da se na preskusni mizi obseva v 60-90 cm . Ker je ojačani izdelek le nekaj sto ali deset baznih parov (bp), ni občutljiv na poškodbe zaradi UV, zato moramo UV-obsevan ojačani fragment obsevati dlje časa, po možnosti čez noč.
Funkcije območja za shranjevanje in pripravo reagentov so: priprava shranjevalnih reagentov, razprševanje reagentov in priprava amplifikacijske reakcijske mešanice, pa tudi shranjevanje in priprava potrošnega materiala, kot so epruvete in konice za centrifugo. Materiale, kot so skladiščni reagenti in potrošni material, ki se uporabljajo za pripravo vzorca, je treba neposredno prevažati na območje za shranjevanje in pripravo reagenta in ne smejo skozi območje zaznavanja ojačanja. Pozitivnih kontrolnih materialov in materialov za nadzor kakovosti v kompletu ne bi smeli hraniti na tem območju, ampak jih je treba hraniti na tem območju. Območje obdelave vzorca.
Funkcija območja priprave vzorca je: ekstrakcija nukleinske kisline (RNA, DNK), shranjevanje in dodajanje v epruveto za amplifikacijo. Za operacije, ki vključujejo klinične vzorce, morajo biti izpolnjene zahteve za zaščitno opremo, osebno zaščito in delovne specifikacije za sekundarne laboratorije za biološko varnost. Ker se med mešanjem vzorcev in čiščenjem nukleinske kisline lahko onesnaži z aerosoli, se na tem območju lahko vzpostavijo pogoji za pozitiven tlak, da se prepreči onesnaženje z aerosoli iz sosednjih območij. Da se izognemo navzkrižni kontaminaciji med vzorci, moramo po dodajanju nukleinske kisline, ki jo bomo testirali, pokriti reakcijsko cev, ki vsebuje reakcijsko zmes. Za potencialno nalezljive materiale je treba odpreti pokrov v kabinetu za biološko varnost in obstajati jasne postopke za ravnanje z vzorci in neaktivacijo.
Funkcija območja amplifikacije je: sinteza DNK, amplifikacija in odkrivanje DNK. Da bi se izognili onesnaženju, ki ga povzročajo aerosoli, je treba hojo po območju čim bolj zmanjšati. Upoštevati je treba, da se na tem območju ne smejo odpirati vse preizkušene reakcijske cevi.
Funkcija območja analize razširjenega izdelka je: nadaljnja analiza in določanje ojačenih fragmentov, kot so hibridizacija, elektroforeza za razgradnjo encimov, denaturiranje tekočinskih analiz z visoko zmogljivostjo, sekvenciranje itd. Izdelki za amplifikacijo nukleinske kisline imajo različne metode analize, kot so metode hibridizacije sonde na membranah ali na mikroplasteh ali čipih (označevanje radionuklidov ali neradioaktivno nuklidno označevanje), neposredna ali prebavljena akrorozna gelna elektroforeza, elektroforeza z geli iz poliakrilamida, južni prenos, metode sekvenciranja nukleinskih kislin, masna spektrometrija itd.
Področje analize izdelkov za amplifikacijo je glavni vir onesnaževanja izdelkov v laboratoriju za PCR, zato je treba paziti, da izdelka za ojačanje ne prenašamo skozi izdelke in delovna oblačila na tem področju. Pri uporabi metode PCR-ELISA za odkrivanje ojačenih izdelkov je treba za pranje plošč uporabljati pralno ploščo, odpadno tekočino pa zbrati v 1 mol / L HCl in je ni mogoče vliti v laboratorij, ampak jo je treba zavreči iz laboratorija PCR. Spusti. Uporabljeni konico je treba namočiti tudi v 1 mol / L HCl in nato dati v vrečko za smeti za odstranjevanje po postopkih, kot je sežig. Ker lahko to območje uporablja določene genske mutacije in strupene snovi, kot so etidijev bromid, akrilamid, formaldehid ali radionuklidi itd., Je treba biti pozoren na varnostno zaščito eksperimentalcev.